Aplicação da pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V. ) braziliensis, por citometria de fluxo, em estudos clínicos da Leishmaniose cutânea localizada

Este estudo se refere ao desenvolvimento de uma nova metodologia, fundamentada na pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V.) braziliensis, por citometria de fluxo-AAPV-IgG para diagnóstico e monitoramento de cura da leishmaniose cutânea localizada-LCL. Em uma primeira etapa de padronização do método, ficou estabelecida a nova metodologia que permite discriminar a reatividade de IgG do soro de pacientes portadores de LCL(L+) daquela observada para indivíduos sem manifestação clínica de LCL(L-), empregando-se em cada teste: a) 500.000 promastigotas vivas de 10 dias de cultivo; b) soro teste na diluição 1:1.024; c) anticorpo secundário anti-IgG humano-FITC na diluição 1:400; d) ambas incubações a 37ºC por 30 minutos e e) o valor do percentual de parasito fluorescentes positivos-PPFP de 60 porcento como ponto de corte entre resultados positivos e negativos

Em uma segunda etapa, foi feita a avaliação comparativa do desempenho do método proposto e de um método tradicional, a Reação de Imunofluorescência Indireta-RIFI. A análise dos índices de desempenho expressos em percentual (sensibilidade, especificidade, valores preditivos, probabilidade de doença pós-teste negativo, taxa de falso-positivo, acurácia e Índice J de Youden) e a Razão de Verossimilhança-RV demonstrou a melhor performance da AAPV-IgG em relação à RIFI, na identificação de casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que os títulos da RIFI foram desprovidos de valor diagnóstico enquanto que na AAPV-IgG, valores de PPFP>60 porcento contribuem para a confirmação do diagnóstico da LCL e valores de PPFP£60 porcento praticamente excluem o diagnóstico de LCL

Posteriormente, foram feitas simulações com situações clínicas que podem concorrer para falso-positividade ou falso-negatividade do teste em estudo. O tempo de duração da lesão na LCL, casos de leishmaniose visceral-LV e doença de Chagas-DC foram identificados como situações clínicas capazes de interferir no desempenho da pesquisa AAPV-IgG aplicada ao diagnóstico da LCL, uma vez que podem apresentar resultados falso-negativos e falso-positivos, respectivamente. Considerando a queda no desempenho da AAPV-IgG na identificação de LCL numa amostragem populacional que inclui LV e DC, foi proposta a avaliação do desempenho da quantificação das subclasses de IgG no esclarecimento de situações positivas no teste original. A análise combinada da AAPV-IgG1/IgG2 mostrou-se útil no esclarecimento de situações positivas no teste original, quando aplicado numa amostragem populacional que inclui LV e DC.. O estabelecimento do ponto de corte de 60 porcento de PPFP para AAPV-IgG1 e de 50 porcento de PPFP para AAPV-IgG2 permitiu o esclarecimento de 93 porcento das situações AAPV-IgG positivas que não apresentavam LCL e confirmar 100 porcento dos casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que um resultado positivo na análise combinada praticamente confirma a presença de LCL e que um resultado negativo praticamente confirma a ausência de LCL. Finalmente, foi demonstrada a utilidade da AAPV-IgG no monitoramento precoce e tardio da cura pós-terapêutica específica da LCL. Observou-se que, que 71porcento dos pacientes sem recidivas após 2 anos do tratamento foram identificados precocemente (30d-PT), com queda na reatividade de PPFP, superior a 10 porcento, na diluição do soro 1:4.096

Aplicação da pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V. ) braziliensis, por citometria de fluxo, em estudos clínicos da Leishmaniose cutânea localizada / Application of antibodies IgG anti-living promastigotes of Leishmania (V. ) braziliensis by flow cytometry in clinical studies of localized cutaneous leishmaniasis

Este estudo se refere ao desenvolvimento de uma nova metodologia, fundamentada na pesquisa de anticorpos IgG anti-formas promastigotas vivas de Leishmania (V.) braziliensis, por citometria de fluxo-AAPV-IgG para diagnóstico e monitoramento de cura da leishmaniose cutânea localizada-LCL. Em uma primeira etapa de padronização do método, ficou estabelecida a nova metodologia que permite discriminar a reatividade de IgG do soro de pacientes portadores de LCL(L+) daquela observada para indivíduos sem manifestação clínica de LCL(L-), empregando-se em cada teste: a) 500.000 promastigotas vivas de 10 dias de cultivo; b) soro teste na diluição 1:1.024; c) anticorpo secundário anti-IgG humano-FITC na diluição 1:400; d) ambas incubações a 37ºC por 30 minutos e e) o valor do percentual de parasito fluorescentes positivos-PPFP de 60 por cento como ponto de corte entre resultados positivos e negativos. Em uma segunda etapa, foi feita a avaliação comparativa do desempenho do método proposto e de um método tradicional, a Reação de Imunofluorescência Indireta-RIFI. A análise dos índices de desempenho expressos em percentual (sensibilidade, especificidade, valores preditivos, probabilidade de doença pós-teste negativo, taxa de falso-positivo, acurácia e Índice J de Youden) e a Razão de Verossimilhança-RV demonstrou a melhor performance da AAPV-IgG em relação à RIFI, na identificação de casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que os títulos da RIFI foram desprovidos de valor diagnóstico enquanto que na AAPV-IgG, valores de PPFP>60 por cento contribuem para a confirmação do diagnóstico da LCL e valores de PPFP£60 por cento praticamente excluem o diagnóstico de LCL. Posteriormente, foram feitas simulações com situações clínicas que podem concorrer para falso-positividade ou falso-negatividade do teste em estudo. O tempo de duração da lesão na LCL, casos de leishmaniose visceral-LV e doença de Chagas-DC foram identificados como situações clínicas capazes de interferir no desempenho da pesquisa AAPV-IgG aplicada ao diagnóstico da LCL, uma vez que podem apresentar resultados falso-negativos e falso-positivos, respectivamente. Considerando a queda no desempenho da AAPV-IgG na identificação de LCL numa amostragem populacional que inclui LV e DC, foi proposta a avaliação do desempenho da quantificação das subclasses de IgG no esclarecimento de situações positivas no teste original. A análise combinada da AAPV-IgG1/IgG2 mostrou-se útil no esclarecimento de situações positivas no teste original, quando aplicado numa amostragem populacional que inclui LV e DC. O estabelecimento do ponto de corte de 60 por cento de PPFP para AAPV-IgG1 e de 50 por cento de PPFP para AAPV-IgG2 permitiu o esclarecimento de 93 por cento das situações AAPV-IgG positivas que não apresentavam LCL e confirmar 100 por cento dos casos de LCL em atividade clínica. A análise das RVs demonstrou que um resultado positivo na análise combinada praticamente confirma a presença de LCL e que um resultado negativo praticamente confirma a ausência de LCL. Finalmente, foi demonstrada a utilidade da AAPV-IgG no monitoramento precoce e tardio da cura pós-terapêutica específica da LCL. Observou-se que, que 71 por cento dos pacientes sem recidivas após 2 anos do tratamento foram identificados precocemente (30d-PT), com queda na reatividade de PPFP, superior a 10 por cento, na diluição do soro 1:4.096.

Colonização de Lutzomyia longipalpis (Lutz e Neiva, 1912): estudos morfológicos e susceptibilidade à infecção por Leishmania spp

Uma colônia de flebotomíneos Lutzomyia Longipalpis originários da caverna da Lapinha (Minas Gerais,Brasil) foi estabelecida em um curto período em nosso laboratório. O objetivo foi obetr quantidade suficiente de insetos para desenvolver experimentos a fim de: estudar os eatágios de desenvolvimento do flebotomíneo,estudar a morfologia do intestino médio, e investigar a susceptibilidade dos insetos à infecções por Leishmania. A colônia foi iniciada com 850 adultos fêmeas as quais foram imediatamente com sangue, e individualizadas para oviposição e identificação. Os ovos foram contados,separados e colocados em postes de criação.As larvas foram alimentadas diariamente em dieta especial. Os insetos foram mantidos durante todo o tempo a 26°C em incubadora. Os adultos emergiram num período de 30-35 dias. A colônia que foi estabelecida e mantida está na 11ª geração.Nós usamos a microscopia elêtronica de varredura para observar a morfologia dos ovos e as larvas.

A superfícies externas dos ovos são cobertas por um exocório caracterizado por arranjos de uma série de cristas longitudinais, paralelas e descontínuas, convergindo nas extremidades. Os estágios larvares foram distinguidos pela presença de um ou dois pares de filamentos caudais.Os segmentos abdominais foram reconhecidos pela presença de pseudo-pernas na superfície dorsal. A superfície ventro-lateral é coberta pela presença de películas. A pupa tem muitas espículas nos segmentos abdominais, e é fácil de observar as asas e pernas.Nós fizemos um estudo histológico do intestino médio dos adultos. Colorações convencionais demonstraram diferenças entre as regiões torácica e abdominal do intestino médio. Experimentos feitos para verificar a infecção do Lu.Longipalpis por Leishmania, constatou que os insetos da colônia sào mais susceptíveis à infecçào do que aqueles originários do campo.A fim de melhor compreender este aspecto, nós desenvolvemos estudos bioquímicos para comparar a presença de proteínas no intestino médio e na saliva destes insetos. Nós concluímos que existem diferenças no conteúdo protéico destes órgãos

Colonização de Lutzomyia longipalpis (Lutz e Neiva, 1912): estudos morfológicos e susceptibilidade à infecção por Leishmania spp / Colonization of Lutzomyia longipalpis (Lutz and Neiva, 1912): Morphological studies and susceptibility to infection with Leishmania spp

Uma colônia de flebotomíneos Lutzomyia Longipalpis originários da caverna da Lapinha (Minas Gerais,Brasil) foi estabelecida em um curto período em nosso laboratório. O objetivo foi obter quantidade suficiente de insetos para desenvolver experimentos a fim de: estudar os eatágios de desenvolvimento do flebotomíneo, estudar a morfologia do intestino médio, e investigar a susceptibilidade dos insetos à infecções por Leishmania. A colônia foi iniciada com 850 adultos fêmeas as quais foram imediatamente com sangue, e individualizadas para oviposição e identificação. Os ovos foram contados, separados e colocados em postes de criação. As larvas foram alimentadas diariamente em dieta especial. Os insetos foram mantidos durante todo o tempo a 26°C em incubadora. Os adultos emergiram num período de 30-35 dias. A colônia que foi estabelecida e mantida está na 11ª geração. Nós usamos a microscopia elêtronica de varredura para observar a morfologia dos ovos e as larvas. A superfícies externas dos ovos são cobertas por um exocório caracterizado por arranjos de uma série de cristas longitudinais, paralelas e descontínuas, convergindo nas extremidades. Os estágios larvares foram distinguidos pela presença de um ou dois pares de filamentos caudais. Os segmentos abdominais foram reconhecidos pela presença de pseudo-pernas na superfície dorsal. A superfície ventro-lateral é coberta pela presença de películas. A pupa tem muitas espículas nos segmentos abdominais, e é fácil de observar as asas e pernas. Nós fizemos um estudo histológico do intestino médio dos adultos. Colorações convencionais demonstraram diferenças entre as regiões torácica e abdominal do intestino médio. Experimentos feitos para verificar a infecção do Lu. Longipalpis por Leishmania, constatou que os insetos da colônia são mais susceptíveis à infecçào do que aqueles originários do campo. A fim de melhor compreender este aspecto, nós desenvolvemos estudos bioquímicos para comparar a presença de proteínas no intestino médio e na saliva destes insetos. Nós concluímos que existem diferenças no conteúdo protéico destes órgãos.

Leishmaniasis tegumentaria americana en los llanos de Bolivia: clave de identificacion pictorica por caracteres de las especies de Lutzomyia 9diptera; Psychodidae) de Yapacani / Cutaneous leishmaniasis in the lowland of Bolivia: identification code by the morphology of Lutzomya difteria of Yapacani

Los estudios entomologicos (ciclo enzootico) relativos a la leishmaniasis tegumentaria en Yapacani que realizo el CENETROP, fueron iniciados con la identificacion de las especies endemicas, donde se constato la presencia de 2 grupos de flebotominos con espermatecas similares; L. Yucumensis y L. c. carrerai en un grupo; L. shannoni, L. punctigeniculata y L. dendrophyla en otro. Con el objeto de identificar estos insectos de una manera rapida y precisa durante los estudios de densidad y de infeccion por flagelados, fue preparada una clave de identificacion pictorica utilizando el color, el tamano, el numero y la localizacion de las escleritas del mesonoto y las areas pleurales. La clave fue evaluada probando ser 100// eficaz, las personas que la utilizaron identificaron a razon de 600 ejemplares/hora/hombre, se constato ademas, su facil utilizacion por personal no especializado (pero debidamente entrenado). No se ha observado una variacion geografica de los caracteres estudiados en especimenes de otras latitudes

Las Leishamniasis en Mexico / The Leishmaniasis in Mexico

Se revisa y evalúa la importancia que las diversas formas clínicas de leishmaniasis tienen en el mundo y, en particular en México, donde no se ha hecho una valoración integral del problema. Se incluye una revisión histórica y los datos accesibles sobre diversos tipos de leishmaniasis, vectores y reservorios que intervienen en el ciclo de transmición y distribución geográfica dentro del país. Se hacen algunas consideraciones socio-económicas con relación a la influencia que la endemia y enzootia por leishamnia pueden ejercer sobre la colonización e incorporación a la agricultura de amplias zonas del país, así como para la productividad de la población afectada y el desarrollo de zonas turísticas

Leishmaniasis difusa / Difuse leishmaniasis

Se presentan cuatro pacientes con leishmaniasis difusa, procedentes de cuatro regiones de Colombia, diagnosticados inicialmente mediante el estudio histopatologico. Dos casos tenian lesiones diseminadas, en una nina de 10 anos y en un hombre de 80 anos. Los otros dos casos, hombres de 33 y 62 anos, presentaron lesiones nodulares iniciales que curaron con calor local y glucantime. Todos tuvieron leishmaninas negativas. Se confirma que la entidad puede curar cuando no esta diseminada. El calor local fue muy util en un caso con lesion unica inicial. La inoculacion al hamster con macerados de biopsias de dos de los pacientes les origino prominentes "histiocitomas" en el hocico y las almohadillas plantares. En un caso no diseminado se identifico el parasito como L.m. amazonensis mediante isoenzimas. En el paciente de 80 anos, el agente causal fue una cepa de L mexicana. Ilustramos las lesiones clinicas, enfatizamos el aspecto tipico de la imagen macrofago mediante imagenes de microscopia electronica. Las caracteristicas de la enfermedad y la literatura sobre la misma se revisa ampliamente